Nein, keine Verzögerungen. Höchstens insofern als das OS eine weitere Datei zusätzlich öffnen muss (Overhead) im Moment wo require ausgeführt wird. Aber wenn das bei Dir spürbar ist stimmt was mit dem OS nicht.
Es verhält sich performancemäßig als ob die sub's im Hauptprogramm stehen würden.
Mach an EINER Stelle im Hauptprogramm ganz am Anfang das require und Du kannst im gesamten Projekt auf die sub's zugreifen.